傳代細胞培養的技術交流

Zhengye Biological

前言

傳代細胞在獸用生物制品行業中具有非常重要的地位,它是非常重要的生產及檢驗原材料。沒有了它們,有很多疫苗是無法生產出來的!沒有了它們,即使疫苗能生產出來,也不能順利的完成檢驗!今天小編就和大家交流一下傳代細胞相關的培養要點以及一瓶合格的疫苗必須要具備的“基本素養”。

傳代細胞有很多品系:如我們常見的Marc-145、Vero、PK-15、ST、MDBK、MDCK、F81、CRFK、DF-1等等,其培養方式分為純懸浮培養,微載體培養,貼壁培養。今天我們就談一談最接地氣的培養方式——貼壁培養。

我們大家都知道疫苗有活苗和滅活苗之分,滅活苗免疫安全性高,但是產生細胞免疫能力差,活疫苗含有低毒力的活的病原微生物,通過細胞培養的方式進行擴繁、濃縮、純化等工藝制成。但是在豬場的實際使用過程中,經常出現疫苗免疫失敗、出現免疫副反應或者爆發疾病的現象,讓人苦不堪言。歸其原因,很可能是因為基礎種細胞在傳代的過程中出現污染等原因造成的。今天小編就為大家分析一下細胞培養過程中細胞污染的幾大可能原因:

第一、種細胞不純凈。在來時就已經染菌了,只染菌的數量少,沒有體現出來,在不斷的傳代過程中,細胞增殖,細菌也在不斷增殖。當細菌達到一定數量以后自然就表現出來,毀掉你苦心經營的細胞。所以企業在使用傳代細胞前一定要提前做好檢驗,確定種細胞的純凈性方可用于大量擴繁。

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第二、因環境不合格而導致的。環境分為操作環境和培養環境,如果在你進行細胞傳代時,你的生產區達不到凈化級別,那么在敞口操作的過程中細菌非常容易落入培養瓶中,培養液中有很多營養物質,非常適合細菌迅速增殖。如果培養環境不達標的話,在培養過程中雖然培養瓶是緊閉的,但是瓶外可能會附著塵埃粒子或者細菌,在操作時對平身消毒不徹底,很可能細菌就被帶入培養瓶中,在經過培養液的滋潤,細菌自然會迅速繁殖,最后毀掉你的細胞!

第三、在傳代過程中,使用的試驗器材滅菌不完全,也可導致傳代失敗。切記高壓滅菌的器材要在兩日內用完,干熱滅菌的器材要在三日內用完。

第四、操作技術不過關,麻痹大意是隱患。操作過程中不戴無菌手套或者不按要求進行手部消毒很容易感染細胞。

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第五、確保使用的培養液是無菌的。雖然很多實驗室是外購的商品化培養基,但是商家也可能有百密一疏的時候。如果在少量生產時,同一瓶培養液被反復開蓋使用,也有被污染的可能的,所以在這種情況下,建議你按照生產的計劃提前一次性無菌分裝到小的容器中,防止反復開口帶來的隱患。

第六、使用的細胞分散液被染菌。如果單次使用量較小,建議提前分裝到小容器備用,防止多次開蓋造成污染。

第七、新生牛血清是傳代細胞生產中的重要原材料,其營養成分高,易染菌,在使用前要進行抽檢,確保無菌后,方可使用。如果用量小,那么建議分裝成小瓶,備用。

以上是小編從事多年培養細工作總結出來幾點細胞污染因素僅供大家參考,了解??赡苓€有沒談到的地方,或者有不當之處,歡迎一起交流。


更新時間:2019-04-20
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